引言

近年來(lái)，檢測(cè)行業(yè)中維生素項(xiàng)目的檢驗(yàn)日益增多。大家在面對(duì)維生素復(fù)雜的操作過(guò)程時(shí)遇到了各種各樣的問(wèn)題，包括樣品稱(chēng)樣量的計(jì)算、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合方式的選擇、樣品稀釋倍數(shù)的選擇、標(biāo)準(zhǔn)菌的活化等等。其中最讓大家頭疼的一個(gè)情況是標(biāo)準(zhǔn)曲線整體渾濁。造成標(biāo)曲整體渾濁的原因是多種多樣的，但是今年我們又發(fā)現(xiàn)了一個(gè)更隱秘的影響因素，現(xiàn)分享給大家，希望大家能避免標(biāo)曲整體渾濁，保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。

想戰(zhàn)勝你的敵人，就要了解你的敵人。維生素的難點(diǎn)到底在哪兒呢？其實(shí)維生素項(xiàng)目的難點(diǎn)很多，還很細(xì)。追究其核心，主要是因?yàn)榫S生素的含量很低，低到非常容易受到其他因素的干擾。而且這些干擾因素，看不見(jiàn)，摸不著，一個(gè)不留神，我們就被偷襲了。結(jié)果就是這樣：

看到此圖時(shí)，大部分實(shí)驗(yàn)員估計(jì)已經(jīng)心生絕望，幾天的辛苦又將付諸東流。所以大部人的反應(yīng)都是趕緊拿遠(yuǎn)點(diǎn)，我再也不想多看它一眼。

但是，這是不對(duì)的呦！

我們應(yīng)該積極面對(duì)問(wèn)題，盯著這個(gè)標(biāo)曲，然后思考。它為啥這么渾濁呢？為啥沒(méi)有梯度呢？為啥標(biāo)曲設(shè)定的時(shí)候要有接種空白和不接種空白呢？好了，你接近真相了！

但是，其實(shí)，捷徑就在眼前。我們?yōu)槭裁床蝗y(cè)測(cè)那套渾濁的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)管呢？哪怕我們需要壓抑住自己內(nèi)心抗拒的波瀾。

一、如果我們測(cè)出來(lái)結(jié)果是這樣的（編撰數(shù)據(jù)）：

二、如果我們測(cè)出來(lái)結(jié)果是這樣的（編撰數(shù)據(jù)）：

那么可能的污染源是啥呢？前文提到了：所有玻璃器皿的潔凈度；槍頭或移液器的潔凈度；環(huán)境的潔凈度；標(biāo)品配制的準(zhǔn)確性及稀釋過(guò)程的準(zhǔn)確性等等。不過(guò)，最近小編還發(fā)現(xiàn)了一個(gè)更隱秘的維生素污染源----接種液。

我們維生素試驗(yàn)用到的接種液在接種前都是經(jīng)過(guò)特別處理后，去除菌液中殘存維生素的。比如葉酸通過(guò)“饑餓”培養(yǎng)6小時(shí)來(lái)清除菌液中殘存葉酸。泛酸、生物素和維生素B₁₂都是通過(guò)“離心-洗脫”三次來(lái)去除接種液中殘存維生素。但是，當(dāng)我們操作不當(dāng)時(shí)會(huì)造成接種液中殘存維生素含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)方法的去除能力，導(dǎo)致接種液中帶入維生素，從而污染體系，導(dǎo)致維生素本底污染，干擾維生素測(cè)定。

比如：葉酸菌株活化時(shí)我們沒(méi)有使用標(biāo)準(zhǔn)要求的4mL葉酸測(cè)定培養(yǎng)基加2mL葉酸標(biāo)準(zhǔn)工作液，而選用了乳酸桿菌肉湯或MRS肉湯進(jìn)行活化。那結(jié)局是很慘痛的，小編自己也深有體會(huì)。

再比如：生物素和維生素B₁₂菌株活化時(shí)使用的乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基中的番茄汁配制不合規(guī)，那也會(huì)引起維生素本底的污染。最近小編就碰到了好幾個(gè)案例，由于維生素標(biāo)準(zhǔn)中未明確番茄汁的配制方法，所以不少實(shí)驗(yàn)員就用了最直接的思路：番茄整個(gè)榨汁。這種番茄汁配制后濃度太高，維生素殘留量太大，超過(guò)了離心洗脫能處理的范圍，所以配制后的情況就如下圖所示。