近期愛爾蘭奶粉污染沙門氏菌的事件鬧的人心惶惶，雖然愛爾蘭政府后來發(fā)布公告表示未在任何愛爾蘭配方奶粉生產(chǎn)廠家發(fā)現(xiàn)沙門氏菌，但我們也不能忽視對(duì)沙門氏菌的檢驗(yàn)，嬰幼兒的免疫系統(tǒng)較為脆弱，尤其是高度易感嬰兒，比如早產(chǎn)兒、低出生體重嬰兒、免疫缺陷嬰兒等，一旦喂食了被沙門氏菌污染的嬰幼兒配方乳粉，極易被感染致病，出現(xiàn)發(fā)燒、腹瀉等腸炎癥狀，嚴(yán)重的可能會(huì)引發(fā)敗血癥，甚至死亡。
下面讓我們溫習(xí)一下GB4789.4-2016沙門氏菌的檢驗(yàn)過程及操作時(shí)的注意事項(xiàng)。
預(yù)增菌
樣品加入緩沖蛋白胨水（BPW）中進(jìn)行預(yù)增菌，任何樣品均需進(jìn)行預(yù)增菌。有盆友問啦，為什么要用BPW呢？那是因?yàn)榘?，食品在加工過程中采用加熱、干燥等加工工藝使得細(xì)胞存在不同程度的受損，而緩沖蛋白胨水（BPW）呢，作為非選擇性的增菌培養(yǎng)基，較高pH的緩沖體系可以幫助受損的細(xì)胞恢復(fù)到穩(wěn)定、活力滿滿的生理狀態(tài)，此處也可使用即用型的BPW，因?yàn)樗僮鞣奖?，?jié)省時(shí)間。
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選擇性增菌
這里要注意啦，增菌接種前一定要把預(yù)增菌后的BPW樣品溶液輕輕搖動(dòng)混勻，這樣做的原因是有些沙門君是懶得動(dòng)的（因?yàn)橛行┥抽T氏菌沒鞭毛），它們會(huì)潛伏在溶液底層，所以我們要把增菌液“搖擺、搖擺”，讓不動(dòng)的沙門君們?cè)谠鼍褐卸计∑饋?，吸出，分別接入TTB和SC培養(yǎng)基中。
此步驟防止漏檢的方式是采用兩種不同的選擇性增菌液（TTB和SC）進(jìn)行增菌，是因?yàn)樯抽T君的家族太龐大了，血清型都有2000多種，所以得加強(qiáng)引誘措施，采用不同的培養(yǎng)溫度和不同抑制性的培養(yǎng)基來給不同的沙門君提供安逸的環(huán)境來繁衍后代，同時(shí)盡量阻攔革蘭氏陽(yáng)性菌和其他大多數(shù)的腸道菌來?yè)v亂，有些細(xì)菌還是會(huì)趁虛而入的。
下面咱們來說一下TTB和SC使用過程中的注意事項(xiàng)：
TTB培養(yǎng)基：待基礎(chǔ)培養(yǎng)基冷卻至50℃以下時(shí)，加入煌綠和碘液，因?yàn)榕囵B(yǎng)基中含有不溶解的CaCO3（用來中和吸收有毒性的代謝物質(zhì)），會(huì)有大量的白色沉淀，在分裝時(shí)應(yīng)邊搖勻邊分裝，接種后培養(yǎng)條件為：42℃±1℃培養(yǎng)18h-24h；
SC培養(yǎng)基：千萬(wàn)不可高壓滅菌，不可過度加熱，最好是現(xiàn)用現(xiàn)配。發(fā)現(xiàn)干粉或溶液變紅就不要使用了。培養(yǎng)基開封后建議用封口膜密封后冷藏保存，可延緩培養(yǎng)基變質(zhì)，接種后培養(yǎng)條件為：36℃±1℃培養(yǎng)18h-24h；
增菌后的TTB與SC
分離
TTB與SC增菌液在接種選擇性分離培養(yǎng)基前，均應(yīng)輕輕搖動(dòng)混勻，原因同選擇性增菌一樣，也是為了防止不運(yùn)動(dòng)的沙門氏菌漏檢；混勻后，用直徑為3mm的接種環(huán)（也就是實(shí)驗(yàn)室用的10μL接種環(huán)）將TTB與SC增菌液“分別”劃線接種于兩種選擇性平板，一種是BS瓊脂，為必選的選擇性分離培養(yǎng)基，另外一種選擇性分離培養(yǎng)基是從XLD瓊脂、HE瓊脂、沙門顯色培養(yǎng)基中選擇一個(gè)即可；沙門氏菌屬在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征參考下圖：
注意：在一種選擇性瓊脂培養(yǎng)基上不同沙門氏菌會(huì)長(zhǎng)出不同的菌落形態(tài)，在做樣品檢驗(yàn)時(shí)要參考上圖中沙門氏菌的菌落特征，將典型菌落及可疑菌落純化后做生化和血清鑒定，避免漏檢，例如：在XLD瓊脂接菌培養(yǎng)18h-24h時(shí)，鼠傷寒沙門氏菌為粉紅色菌落，呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，大腸埃希氏菌為黃色菌落，豬霍亂沙門氏菌為淡黃色菌落，比大腸埃希氏菌的顏色略淺，易混淆，為防止漏檢，XLD瓊脂平板上黃色菌落也應(yīng)做生化和血清鑒定，不可忽視。
下面咱們來說一下選擇性瓊脂培養(yǎng)基使用過程中的注意事項(xiàng)：
BS瓊脂：配制時(shí)不可高壓，煮沸滅菌即可，不可反復(fù)溶解，避免降低其選擇性；特別需要注意的一點(diǎn)是必須使用前一天配制，且在48h內(nèi)使用，超過48h也會(huì)降低其選擇性，請(qǐng)于室溫暗處貯存，接種后培養(yǎng)條件為：36℃±1℃培養(yǎng)40h-48h；
XLD瓊脂：配制時(shí)不可高壓，煮沸滅菌即可，不可反復(fù)溶解，避免降低其選擇性，請(qǐng)于室溫暗處貯存；該培養(yǎng)基宜于當(dāng)天配置，第二天使用，接種后培養(yǎng)條件為：36℃±1℃培養(yǎng)18h-24h；
?HE瓊脂：配制時(shí)不可高壓，煮沸滅菌即可，不可反復(fù)溶解，避免降低其選擇性；接種后培養(yǎng)條件為：36℃±1℃培養(yǎng)18h-24h；
沙門氏菌顯色培養(yǎng)基：參考陸橋ESM005沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（SA）使用說明書。
好啦，咱們今天就先到這吧，關(guān)于沙門氏菌的生化和血清試驗(yàn)操作下篇文章再細(xì)細(xì)道來。