前言

最近小編注意到，有一個(gè)號(hào)稱能讓“微生物飛起來”的新型鑒定技術(shù)——MALDI-TOF技術(shù)，在行業(yè)內(nèi)名聲大噪。那么，“這究竟是一個(gè)什么樣的技術(shù)呢？”下面就來跟著小編，一起揭開它神秘的面紗！

一、微生物鑒定方法體系

微生物鑒定方法多種多樣。如最常使用的形態(tài)觀察、?鏡檢、?重要的生化反應(yīng)，還有準(zhǔn)確度較高的基因鑒定法。

那么今天小編要介紹的MALDI-TOF方法，是利用對(duì)核糖體蛋白檢測(cè)及與標(biāo)準(zhǔn)圖庫比對(duì)的一種質(zhì)譜方法。

二、MALDI-TOF的原理

MALDI-TOF，全稱基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）。

該方法檢驗(yàn)原理是：

微生物中分子量在2000-20000Da范圍內(nèi)的核糖體蛋白質(zhì)，其表達(dá)基本不受培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、滅活方式以及生長周期等的影響，屬于保守表達(dá)的蛋白質(zhì)，不同種的微生物（甚至亞種）其保守蛋白會(huì)有差異，因此每種微生物有其獨(dú)特的蛋白質(zhì)指紋圖譜（PMF）；通過MALDI-TOF測(cè)得的微生物蛋白質(zhì)指紋圖譜，再與標(biāo)準(zhǔn)庫里的指紋圖譜進(jìn)行匹配、對(duì)比，從而完成對(duì)微生物快速準(zhǔn)確的鑒定。

圖譜形成、比對(duì)及鑒定結(jié)果

三、操作流程

1、取純化后的新鮮培養(yǎng)物，直接涂靶或進(jìn)行提取后涂靶；2、樣品點(diǎn)靶后，與基質(zhì)混合晾干；3、將靶板進(jìn)艙，確認(rèn)真空度均正常和參數(shù)設(shè)置均準(zhǔn)確后，方可開始采譜；4、獲得樣品蛋白質(zhì)圖譜后，系統(tǒng)將自動(dòng)與標(biāo)準(zhǔn)庫里的指紋圖譜進(jìn)行匹配、對(duì)比；5、生成最后的結(jié)果與報(bào)告。

四、MALDI-TOF的優(yōu)點(diǎn)

這項(xiàng)“如此高大上”的技術(shù)，具體有什么優(yōu)點(diǎn)呢？

五、MALDI-TOF的其他應(yīng)用

除了微生物鑒定外，MALDI-TOF技術(shù)還可應(yīng)用于多種領(lǐng)域，范圍極廣：

1、可疑菌溯源性分析：在檢測(cè)出未知菌時(shí)，可自建菌庫，保留菌株圖譜信息，有助日后可疑菌的溯源分析。

2、腫瘤篩查中的運(yùn)用：利用弱陽離子磁珠聯(lián)合MALDI-TOF-MS分析腫瘤患者和健康對(duì)照血清蛋白質(zhì)表達(dá)譜，鑒定差異表達(dá)蛋白，建立疾病診斷模型，探索該疾病的發(fā)病機(jī)制。

3、細(xì)菌耐藥性分析：MALDI-TOF MS檢測(cè)細(xì)菌耐藥性的方法主要分為 3 類:?檢測(cè)耐藥菌株的特征性質(zhì)譜峰、細(xì)菌酶活性作用下抗菌藥物的改變和抗菌藥物存在下細(xì)菌生長情況。

結(jié)語

傳統(tǒng)的微生物鑒定技術(shù)復(fù)雜、繁瑣，耗時(shí)、耗力，對(duì)技術(shù)人員的專業(yè)水平要求較高，而使用飛行質(zhì)譜鑒定技術(shù)相對(duì)簡便快速結(jié)果準(zhǔn)確。相信在不久的將來，這項(xiàng)技術(shù)會(huì)得到越來越多的關(guān)注，應(yīng)用也越來越廣。