引言

經(jīng)過層層剝離，迷霧終將散去，光明即將到來。

我們還需要兩件工具，生化鑒定和血清學(xué)鑒定。

它們會幫我們鑒別黑白。

真相永遠(yuǎn)只有一個(gè)！

一、純化和生化鑒定

國標(biāo)流程要求從選擇分離平板上挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落，接種三糖鐵、賴氨酸和營養(yǎng)瓊脂，如果三糖鐵、賴氨酸結(jié)果不能排除，那些再做其他生化。這里最大的困難是一個(gè)單菌落不夠接種三種培養(yǎng)基。而且初篩的作用有限，表中能排除的兩項(xiàng)，菌落在平板上都不是最典型的沙門氏菌特征。

所以我們建議第一天先純化，第二天用純化后的菌將所有生化一起做。時(shí)間上與國標(biāo)一樣，都是兩天得到完整生化結(jié)果，但是菌經(jīng)過了純化，排除了選擇分離平板對生化的干擾，又獲得了大量單菌落，既能滿足生化試驗(yàn)的用菌量，也能挑菌做血清。

操作順序明白后，我們再來理一下試驗(yàn)思路。

國標(biāo)條款5.4.2.1反應(yīng)序號A1:典型反應(yīng)判定為沙門氏菌屬。如尿素、KCN和賴氨酸脫羧酶3項(xiàng)中有1項(xiàng)異常，按表4可判定為沙門氏菌。如有2項(xiàng)異常為非沙門氏菌。

根據(jù)上述這段話，我們理解表4所列的就是尿素、KCN和賴氨酸脫羧酶3項(xiàng)中有1項(xiàng)異常的組合，那么表4的硫化氫和靛基質(zhì)應(yīng)該與A1中一致。所以我們將表3和表4合并，再把表4補(bǔ)充完整，就可以得到下表。

我們自己做生化鑒定時(shí)，如果出現(xiàn)上表中的組合，那么就按判定結(jié)果進(jìn)行補(bǔ)充生化試驗(yàn)即可。

如果不符合上表中任何一種組合，那么直接判非沙門氏菌。

如此一來，沙門氏菌生化鑒定的思路就簡化了。

另外，表4第二行組合需要補(bǔ)充一些群生化，目的是看這株菌到底屬于哪個(gè)群。這里的群其實(shí)是沙門氏菌分類的亞屬。如果遇到了，補(bǔ)齊下表生化即可。

我們目前常見菌做生化的情況如下：

ATCC14028 鼠傷寒沙門氏菌，生化結(jié)果符合A1組合。

ATCC13076 腸炎沙門氏菌，生化結(jié)果符合A1組合。

CMCC50071 傷寒沙門氏菌，生化結(jié)果符合A1組合。

ATCC10708 豬霍亂沙門氏菌，生化結(jié)果符合A3組合，A3的補(bǔ)充試驗(yàn)ONPG也為陰性。

ATCC12325?雙相亞利桑那，生化結(jié)果符合A1組合。

ATCC25922 大腸埃希氏菌，生化結(jié)果硫化氫與靛基質(zhì)不符合A1組合，故判非沙門。

CMCC49005 奇異變形桿菌，生化結(jié)果賴氨酸與尿素不符合A1組合，故判非沙門。

從上述不同菌的生化能看出，選擇分離平板中常見的干擾菌在生化層面幾乎都被排除。大腸埃希氏菌通過硫化氫和靛基質(zhì)排除；奇異變形桿菌通過賴氨酸和尿素排除。所以生化鑒定的效果還是很好的，不過依然有一些情況需要用血清學(xué)進(jìn)行輔助判定。

二、血清學(xué)鑒定

關(guān)于血清學(xué)有幾點(diǎn)需要明確：

1、血清學(xué)在鑒定方面只是生化鑒定的輔助，血清學(xué)主要的作用在于沙門氏菌的分型。

2、血清學(xué)鑒定（主要是多價(jià)血清的鑒定）是沙門氏菌鑒定的重要部分，無論生化鑒定結(jié)果如何，血清學(xué)試驗(yàn)都必須完成。

3、血清學(xué)分型在此國標(biāo)中是選作項(xiàng)目，而且內(nèi)容較為復(fù)雜，我們不做贅述。我們重點(diǎn)介紹多價(jià)血清的鑒定。

首先我們來認(rèn)識一下沙門氏菌常見的三種抗原，O抗原、H抗原和Vi抗原。

O抗原是菌體抗原，為細(xì)胞壁脂多糖中特異性多糖部分，以阿拉伯?dāng)?shù)字順序排列。每個(gè)沙門氏菌血清型含一種或多種O抗原。基本每一個(gè)沙門氏菌都會有O抗原。

H抗原是鞭毛抗原，有鞭毛就會有動(dòng)力，所以大部分沙門氏菌都有H抗原，只有雞雛沙門氏菌是沒有鞭毛的，也就沒有H抗原。H抗原分第Ⅰ相和第Ⅱ相兩種。第Ⅰ相特異性高，以a，b，c。。。。表示。第Ⅱ相特異性低，可為多種沙門氏菌共有，以1，2，3。。。。。表示。同時(shí)擁有兩個(gè)相的沙門氏菌稱雙相菌。

Vi抗原是一種表面抗原。只有少數(shù)沙門氏菌才有，比如傷寒沙門氏菌、丙型副傷寒沙門氏菌等。Vi抗原可阻止O抗原與其相應(yīng)抗體的凝集反應(yīng)。Vi抗原不穩(wěn)定，可通過加熱破壞。

做血清試驗(yàn)時(shí)最好每步都帶上自凝試驗(yàn)，即可以觀察自凝，也可以做為陰性對照（一般都不會自凝），試驗(yàn)的操作流程如圖所示：

備注：

1、上述流程只涉及了多價(jià)凝集試驗(yàn)，不涉及H抗原分型試驗(yàn)。

2、熱處理一般建議，將菌做成濃菌液于沸水浴中煮沸15-60min，之后再進(jìn)行O多價(jià)凝集試驗(yàn)。

3、當(dāng)H多價(jià)不凝集時(shí)應(yīng)考慮菌活力是否不足，以及是否經(jīng)過了半固體平板培養(yǎng)讓鞭毛伸展。

血清學(xué)操作視頻：

O多價(jià)凝集試驗(yàn)和H多價(jià)凝集試驗(yàn)：

三、結(jié)果與報(bào)告

綜合以上生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定的結(jié)果，報(bào)告25g（mL）樣品中檢出或未檢出沙門氏菌。

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沙門的迷霧就此破除，陽光再次照耀大地。

希望本文能對大家有幫助！