? ? ? ?感謝各位老師參與11月17日的陸橋公益直播課《2022版國標食品中葉酸和維生素B12微孔板法測定解析》，如您未能及時聆聽，我們已設(shè)置回放，有效期一周（至2022年11月27日） 。
? ? ? ?期待您再次參與陸橋的直播課。
直播課問題解答
1.?葉酸標準曲線制作幾平行？
根據(jù)2022版國標最新要求，葉酸是2-3平行，維生素B12是3平行。
2.?標準系列管怎么混勻？
標準系列管各組成溶液添加完畢后，用渦旋振蕩器混勻。
3.?試管法有試劑盒嗎？
有試管即用型試劑盒，分別是葉酸(GVT1001)、維生素B12(GVT1002)、生物素(GVT1003)和泛酸(GVT1004)。
4.?容量瓶需要定期檢定嗎？
需要，GB/T 27405-2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范?食品微生物檢測》標準中明確規(guī)定需要對定容設(shè)備定期檢查以確保其準確度。
5.?有時強化食品生產(chǎn)企業(yè)會在標注量上故意多添加一些，這種情況下該如何估算？
第一次做此類樣品只能預估含量，適當多選幾個稀釋倍數(shù)。后續(xù)有經(jīng)驗了，可根據(jù)經(jīng)驗預估含量。
6.?標準系列管最后高濃度的幾個點不穩(wěn)定有什么可能的原因？
原因較多，可以重點看標品配制的準確性和添加的準確性，特別是移液槍的準確度。
7.?請問您用試管的多管法紫外分光光度計測定標準曲線選幾次曲線？國標里面沒有明確規(guī)定，也沒有對線性做明確要求。
國標對標準曲線的擬合方式?jīng)]有明確要求，實驗室內(nèi)部統(tǒng)一即可。我們一般用二次多項式曲線擬合。
8.?國標法葉酸培養(yǎng)基滅菌以多少毫升為宜？以前做過會發(fā)生褐變。
培養(yǎng)基用量根據(jù)實驗樣品數(shù)量來定，一般滅菌后要及時從高壓鍋中取出，立刻降溫，避免過度加熱。
9.?按含量選擇稀釋倍數(shù)但是還是超標曲，為什么呢？
一般是因為樣品的實際含量高于樣品標簽值，建議按經(jīng)驗含量值預估稀釋倍數(shù)。
10.?玻璃器具浸泡可以只用洗滌劑浸泡嗎，需要浸泡多久？
2022版國標上明確寫可以用鹽酸或月桂基磺酸鈉洗滌劑浸泡，但未明確浸泡時間。2014版國標上要求鹽酸浸泡2小時。我們目前還是浸泡2小時。
11.?鹽酸浸泡，鹽酸濃度有要求不？
國標上試劑配制里有寫，例如葉酸在國標3.2.5條款中要求“量取100mL鹽酸（濃度36%-38%）與50倍水混合”。
12.?培養(yǎng)基用什么盛裝滅菌？如何混勻？
用三角瓶就可以，滅菌前通過玻璃棒攪拌或浸泡方式充分溶解。
13.?曲線達到多少算合格呢？
國標上沒有明確要求。我們自己一般用二次多項式曲線擬合，R2值一般0.99常見，最低要求0.97。
14.?酶解法，如何進行預估比較合理？
酶解法處理的是原生樣品，可查閱相關(guān)資料獲取含量范圍或通過預實驗先摸索含量。
15.?標準曲線需要0.999嗎？
維生素實驗3個9很難實現(xiàn)。我們自己一般用二次多項式曲線擬合，R2值一般0.99常見，最低要求0.97。
16.?維生素B12國標方法計算公式能麻煩講解一下么？
維生素B12國標計算公式中只有一個f，沒有像葉酸一樣寫明是V×f，所以維生素B12的f實際就是V和f的乘積結(jié)果。
17.?5mL不含葉酸的標準工作液是什么？
應(yīng)該是5mL不加葉酸標準工作液的無菌葉酸測定培養(yǎng)基，其實就是葉酸測定培養(yǎng)基。
18.?曲線為什么會飄點呢？
要結(jié)合具體數(shù)據(jù)才能分析，一般來說與標品配制的溶解和添加準確性有關(guān)系。
19.?維生素B12過濾的樣品用都過濾完嗎？
不需要，只要過濾出需要的量就可以了。
20.?微孔法數(shù)據(jù)處理是我們蝴蝶軟件嗎？怎么用的呢？
Excel和蝴蝶軟件都可以，蝴蝶軟件用法不變，只有稀釋度那里需要根據(jù)實際稀釋倍數(shù)進行調(diào)整換算。
21.?更新版的陸橋維生素B12培養(yǎng)基顏色方面有改進嗎？
2022版國標對培養(yǎng)基成分沒有調(diào)整，所以我們培養(yǎng)基配方不會改變，還是與國標保持一致。
22.?葉酸計算公式C0?是接種空白嗎？一定要扣除零點嗎？國標里的公式?jīng)]有明確標注要扣零點。
C0?是酶解法公式中的參數(shù)，是酶空白測定的值。一般常用的直接提取法是不會用到這個參數(shù)的。
23.?萊士曼氏乳桿菌不太穩(wěn)定，有什么好的保存方法？
我們實驗室菌株長期保藏用-80度甘油法，一個月內(nèi)保藏放2-8℃冰箱，葉酸和生物素的菌株可以平板直接放入冰箱，維生素B12?的萊士曼乳桿菌需穿刺培養(yǎng)后，放入冰箱。
24.?同樣的培養(yǎng)基，同樣的菌株活化方法，維生素B12國標法長但微孔板不長是什么原因呢？
微孔板法的培養(yǎng)體系是300μl，遠小于試管法的10mL。所以對標準品的混勻程度，菌活力、濃度及菌的混勻程度，各級溶液的混勻，移液槍的準確度都有更高的要求。建議從這些方面排查原因。
25.?新版維生素B12國標方法的計算公式單位最后怎么換算成μg/100g？
公式中有換算系數(shù)，按公式計算后單位即為μg/100g。
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（回放截止到2022年11月27日）
